PCR基因擴增儀是現(xiàn)代分子生物學中非常重要的技術工具和設備,具有廣泛的應用和市場前景。同時,對于研究者和工作者來說,需要深入掌握PCR基因擴增儀的原理、參數(shù)設置、操作技巧和質(zhì)量控制等方面,才能更好地應用和利用這一技術儀器,推動科學的發(fā)展和人類的進步。原理是:將DNA模板、引物和聚合酶等反應物混合,通過一系列的反應循環(huán),在保證反應物不受污染的情況下,加熱使雙鏈DNA分離為兩個單鏈,降溫使引物在目的基因的兩條單鏈上特異性結合并延伸合成新鏈,反復循環(huán)反應,使得DNA數(shù)量呈指數(shù)狀增長,從而達到擴增的目的。
PCR基因擴增儀的技術特點:
1.控溫系統(tǒng):控制系統(tǒng)可以準確地控制溫度,使反應在一定范圍內(nèi)穩(wěn)定進行,保證反應條件準確正確。
2.熱蓋:通過控制熱蓋的溫度和加熱時間,相當于是對反應體系進行“局部消毒”或者“熱保護”,避免反應體系中產(chǎn)生的雜質(zhì)影響反應結果。
3.冷卻系統(tǒng):PCR反應溫度通常在95℃~60℃間波動,慣性能量會不斷向周圍環(huán)境釋放,導致溫度的波動,反應漂移,冷卻系統(tǒng)的作用就是保證反應體系的穩(wěn)定性。
4.連接器:還有一種叫做“連接器”的裝置,用于連接熱蓋和反應管蓋,保證熱蓋與反應管之間的緊密貼合,從而妥善地處理反應盤中反應液的半蒸發(fā)、干燥等問題。
PCR基因擴增儀的使用方法:
1.準備反應液:根據(jù)反應需要,配置適當?shù)姆磻w系,具體包括DNA模板、引物、聚合酶、緩沖液等,反應物應在零級環(huán)境下秤量。保證各反應物質(zhì)量的潔凈和有效性。
2.加熱反應體系:將反應體系加熱到95℃,使模板DNA分離成單鏈。
3.降溫、延伸:將反應體系迅速降溫至引物的退火溫度,使引物結合到DNA模板上,聚合酶沿著模板鏈向前合成延伸反應產(chǎn)物。
4.可選性擴展階段:根據(jù)反應需要,進行擴展階段,通常在72℃下進行,目的是為了合成整個產(chǎn)物。
5.結束反應:反應結束后,將反應管從PCR擴增儀中取出,可通過凝膠電泳和其他實驗方法進行檢測和分析。